PCR em análise de DNA
Departamentos de polícia, promotores e laboratórios criminais em todo o mundo utilizaram o poder da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para ajudar na investigação de cenas de crime. PCR auxilia na construção de perfis de DNA, que servem como um"código de barras" único para cada indivíduo, tornando esta uma das grandes instâncias onde a biologia e a tecnologia se fundem para resolver problemas sociais.
COMO SOMOS DIFERENTES?
Após a conclusão do Projeto Genoma Humano, foi determinado que o genoma é composto por aproximadamente 3 milhões de bases. Destes, ~ 99,5% são idênticos em todos os humanos, o que implica que não somos tão diferentes, afinal.
A variação que observamos que faz com que cada um de nós pareça único se revela principalmente devido às diferenças no número de sequências repetidas para regiões específicas do genoma. Dessas regiões, a repetição em tandem curta (STR) foi identificada e é a repetição mais comumente usada (usando 13 loci ou regiões) na aplicação hoje.
PERFIL DE DNA ATRAVÉS DE STR
STR é composto de bases repetidas de 3-4 nucleotídeos encontradas em diferentes loci no genoma humano. Cada indivíduo herda duas cópias, ou alelos de seus pais, portanto, um perfil STR poderia ser construído.
Para diferentes populações, vários loci têm sido usados como padrão na identificação de indivíduos. Para corresponder aos perfis STR, os números de repetição para cada alelo devem ser os mesmos. Por exemplo, no locus D3S1358 (ver Figura 1), se a amostra obtida tiver um perfil STR nesse locus de 7,5, então o suspeito B já está excluído para corresponder à amostra obtida. Se os perfis de alelo coincidirem, a probabilidade é calculada dependendo da frequência do alelo para o local específico. Isso implica que o suspeito não é automaticamente a fonte definitiva da amostra quando os perfis de STR coincidem.
Bancos de dados também foram estabelecidos para auxiliar no processo de investigação, como o Combined DNA Index System (CODIS), mantido pelo FBI dos EUA.
PCR NO FLUXO DE TRABALHO DE PERFIL DE STR
1. As investigações partem da coleta de materiais biológicos como dentes, cabelos, ossos e fluidos da cena do crime.
2. As amostras são então transferidas para o laboratório forense para processamento posterior, onde o DNA é extraído das amostras (~ 1 ng de amostra é adequado para PCR).
3. Os loci STR específicos são direcionados e amplificados por PCR. Os fragmentos de PCR são posteriormente analisados por sequenciação ou eletroforese.
4. Os perfis STR são gerados e, se disponíveis, verificados com perfis ou bancos de dados suspeitos.
O perfil de STR requer termocicladores robustos para auxiliar no processo de investigação. São necessários resultados confiáveis de experimentos em laboratório úmido para ajudar os departamentos de polícia e promotores em seus relatórios. A Esco Lifesciences oferece termocicladores com excelentes taxas de aquecimento e resfriamento, temperatura precisa e uniforme para garantir perfis STR confiáveis.